ИФА анализ – иммуноферментный анализ крови: что это такое? Расшифровка, диагностика и как проводится исследование, принцип метода

Что такое ИФА

В первую очередь разберем, что такое иммунные реакции.

– это специфические реакции связывания антигена с антителом с образованием иммунного комплекса. Что это значит? На поверхности каждой клетки любого организма имеются особые структуры, которые называются

. Антигены в целом – это молекулы, которые несут информацию о клетке (подобно информации на бейдже у человека, где указываются основные данные этого человека).

Индивидуальные и видовые антигены – что это? Зачем нужны эти антигены?

Имеются антигены индивидуальные, то есть присущие только данному конкретному организму. Эти индивидуальные антигены разные у всех людей, есть похожие друг на друга, но все равно отличающиеся. Двух одинаковых копий индивидуальных антигенов в природе не существует!

Второй основной тип антигенов – это видовые антигены, то есть присущие какому-либо конкретному виду живых существ. Например, у человека присутствует свой видовой антиген, общий для всех людей, у мышей имеется свой мышиный видовой антиген и т.д. На поверхности каждой клетки обязательно присутствуют видовой и индивидуальный антиген.

Видовой антиген используют клетки иммунной системы для опознавания «свой – чужой».

Как происходит узнавание антигена?

Иммунная клетка связывается с подозрительной клеткой и проводит опознание именно по индивидуальному антигену. В памяти иммунной клетки «записано» как выглядит «свой антиген». Таким образом, если антиген подозрительной клетки совпадает с описанием «свой антиген», значит, эта клетка собственного организма и опасности не представляет.

Тогда иммунная клетка «отвязывается» и уходит. А если антиген не совпадает с описанием «свой», тогда иммунная клетка идентифицирует эту клетку как «чужой», а значит потенциально опасный для всего организма. В этом случае иммунная клетка не «отвязывается», а начинает уничтожать опасный объект. Точность такого иммунологического узнавания поражает воображение – 99,97%. Ошибок практически не бывает!Что такое антитело, иммунный комплекс?А что представляет собой антитело?

Антитело – это особая молекула, расположенная на поверхности иммунной клетки. Именно антитело и связывается с антигенами подозрительной клетки. Далее антитело передает информацию внутрь клетки, где происходит опознавание, и получает обратный сигнал двух видов «свой» или «чужой». При сигнале «свой» антитело разрушает связь с антигеном и отпускает клетку.

Что такое иммунный комплекс?При сигнале «чужой» ситуация разворачивается иначе. Антитело не разрывает связь с антигеном, а наоборот, посылая специфические сигналы, вызывает «подкрепление». Биологически это означает, что другие антитела, находящиеся в другой части клетки, начинают перемещаться к участку, откуда идет сигнал опасности, и также образуют связь между собой и пойманным антигеном.

Виды антител (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)Антитела – это белковые структуры, которые, соответственно, имеют химическое название, которое и используется как синоним слова антитела. Итак, антитела = иммуноглобулины.

Существуют 5 типов иммуноглобулинов (Ig), которые связываются с разными видами антигенов в разных местах человеческого организма (например, на коже, на слизистых, в крови и т. д.). То есть антитела имеют разделение труда. Эти иммуноглобулины называются буквами латинского алфавита – A, M, G, D, E и обозначаются следующим образом – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

В диагностике используют только один вид антител, который наиболее специфичен в отношении определяемого микроба. То есть связывание данного вида антител с определяемым антигеном происходит всегда. Чаще всего применяются IgG и IgM.

Именно этот принцип иммунной реакции (уникальная точность и специфичность узнавания определяемого биологического объекта) лежит в основе иммуноферментного анализа.В силу высокой точности антител в узнавании антигенов, точность всего метода иммуноферментного анализа оказывается также высочайшей.

ИФА — современный диагностический метод, который применяется для диагностики инфекций, гормональных и иммунных нарушений, онкологических заболеваний в лабораторных условиях. Метод позволяет выявить антитела к инфекции уже на ранних сроках заболевания. Данный метод относится к непрямым диагностическим методам, так как он выявляет иммунный ответ организма.

Среди преимуществ ИФА в сравнении с другими методами диагностики можно выделить высокий уровень технологичности, что уменьшает вероятность ошибок. Метод является высокочувствительным и применяется для диагностики заболеваний как у детей, так и у взрослых. Существует обширное количество различных модификаций ИФА.

Метод ИФА основывается на специфичности иммунохимических реакций, а также физико-химических закономерностях реакций комплексов антиген-антитело. Реакции производятся с участием специфических ферментов, которые являются метками для определения антител. В результате иммунохимической реакции строго определенные антитела связываются с соответствующими антигенами.

Исследование крови методом иммуноферментного анализа почти исключает возможность получения ложноположительного результата. О положительном или отрицательном результате специалисты лабораторной диагностики судят исходя из того, произошло ли окрашивание раствора в ходе ферментативной индикации комплекса антиген-антитело. Если раствор окрасился, то произошло взаимодействие антигена с антителом, результат ИФА положителен.

Антитела — это белки, которые иммунная система вырабатывает в ответ на проникновение инфекции. В лабораторной диагностике именно антитела служат маркером проникновения инфекции. Общим правилом подготовки к анализу на антитела является сдавать кровь из вены натощак (после приема пищи должно пройти не менее четырех часов).

Анализы на инфекции могут быть качественными (дают ответ, есть ли инфекция в крови) и количественными (показывают уровень содержания антител в крови). Норма антител для каждой инфекции своя (для некоторых их не должно быть совсем). Референсные значения (показатели нормы) антител можно получить с результатом анализа. В онлайн-лаборатории Lab4U можно сдатькомплекс анализов на все TORCH-инфекции за один раз и со скидкой 50%!

Вам не нужно долго ждать в регистратуре

Все оформление и оплата заказа происходит онлайн за 2 минуты.

Путь до медцентра не займет более 20 минут


Наша сеть вторая по величине в Москве, а еще мы есть в 23 городах России.

Сумма чека не шокирует вас

Постоянная скидка в 50% действует на большинство наших анализов.

Вам не придется приходить минута-в-минуту или ждать в очереди

Сдача анализа происходит по записи в удобный промежуток времени, например с 19 до 20.

Вам не придется долго ждать результатов или ходить за ними в лабораторию

Мы пришлем их на эл. почту в момент готовности.

На самом деле иммуноферментный анализ не является инновацией современного общества. Его изобрели еще в 80-х годах. Но для проведения таких исследований требовалась громоздкая дорогостоящая аппаратура. Поэтому использовали такой метод только в специально оснащенных научных лабораториях: его применяли для типирования клеток и тканей.

А вот широкого распространения в диагностической медицине он тогда не получил, использовать его было технически сложно и крайне затратно. Лишь с развитием техники и изобретением биополимерных материалов ИФА усовершенствовали. После чего метод стал популяризироваться и завоевывать доверие в медицинских кругах.

Как уже было сказано выше, данный метод подразумевает обнаружение в биоматериале – крови, околоплодных водах, стекловидном теле или спинномозговой жидкости – определенных групп иммуноглобулинов.

Различают исследования без нанесения антигена на поверхность и твердофазный иммуноферментный анализ, который предполагает проведение реакции в специальных лунках. Последний метод имеет большую чувствительность и надежность, поэтому именно таким образом проводят анализ в медицинских лабораториях для обнаружения заболеваний человека.

Анализ ферментативной фазы диагностики проводится с помощью метода, который имеет название “колориметрия”. Дело в том, что не только цвет материала дает информацию об инфекции, но и получившаяся в результате химических реакций плотность окраса. Именно этот показатель определяет концентрацию патогенного микроорганизма. Если по старинке используют ручной метод диагностики, то для определения указанных показателей выстраивают специальный калибровочный график.

В современных лабораториях сегодня редко применяют ручной метод. Для проведения анализа ИФА используют специальный аппарат – колориметр, в котором вручную задаются лишь параметры исследования, а затем всю работу, включая построение графика, прибор проводит автоматически.

Иммуноферментный анализ крови — диагностика, которая позволяет комплексно оценить деятельность защитных функций организма, выявить состояние иммунодефицита при инфекционных болезнях, аутоиммунные нарушения, паразитов в организме, гематологические патологии, гормональные нарушения (гормоны щитовидной железы, ТТГ).

В чем суть метода?

Чтобы это понять, следует знать, как работает иммунная система человека, что такое антиген, антитела, какие функции они выполняют.

  • Антиген в нашем организме представляет собой молекулу, которая специфично связывается с антителом. Он переносит определенную информацию о клетке.
  • Когда в кровь попадает чужеродный антиген, начинают вырабатываться антитела (иммуноглобулины Ig), которые распознают его и стремятся уничтожить.
  • Такое взаимодействие называется иммунным комплексом, на котором и основан метод диагностики ИФА.
  • Анализ позволяет определить уровень гормонов, иммуноглобулинов, иммунологических комплексов и других биологически активных веществ, поэтому важен для комплексной диагностики.

Различные классы антител IgG, IgM, IgA

Иммуноферментный анализ ИФА на ВПГ 1 и 2

Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig (G, A, M). Антитела к вирусу, при наличии инфекции, определяются на очень ранней стадии, что обеспечивает эффективную диагностику и контроль течения заболеваний. Самые распространенные методы диагностики инфекций — это тесты на антитела класса IgM (острая фаза течения инфекции) и антитела класса IgG (устойчивый иммунитет к инфекции). Эти антитела определяют для большинства инфекций.

Однако, один из самых распространенных анализов — госпитальный скрининг (анализы на ВИЧ, сифилис и гепатиты B и С) не дифференцирует тип антител, поскольку наличие антител к вирусам данных инфекций автоматически предполагает хроническое течение заболеваний и является противопоказанием, например, для серьезных хирургических вмешательств. Поэтому важно опровергнуть или подтвердить диагноз.

Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител. Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом 1-4 недели.

Предлагаем ознакомиться:  Анализ на гонорею виды диагностических исследований

Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG. Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых.

Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А.

В связи с множеством исследуемых объектов – начиная молекулярными соединениями и заканчивая бактериями, вирусами, а также по причине разных условий диагностики ИФА, существует много вариантов осуществления данного метода.
Возможно деление на подвиды по виду иммунохимического взаимодействия на начальной стадии анализа.

Так, если в системе есть лишь анализируемое соединение и центры связывания, которые соответствуют ему (специфичные антитела, а также антиген), то метод именуется неконкурентным. Если на изначальном этапе в системе одновременно есть анализируемое соединение плюс его аналог (помеченное ферментом или иммобилизированное в твердой фазе анализируемое соединение), которые конкурируют за определенный лимит центров специфического связывания, такой метод именуется конкурентным.

Примером неконкурентного вида иммуноферментного анализа является «сэндвич-метод». Среди конкурентных видов иммуноферментного анализа основными являются прямой конкурентный формат и непрямой конкурентный формат.

Варианты выявления в крови человека иммуноглобулинов разных классов.

  • Выявление антител IgM, которое проводится изолированно, свидетельствует о первичном инфицировании человека.
  • Обнаружение в сыворотке крови одновременно антител класса IgM и IgG происходит также при первичном инфицировании, произошедшем в последние 2-3 месяца. Или же такое сочетание может быть признаком обострения хронического заболевания.
  • Таким образом, такие результаты при беременности не всегда говорят о первичном заражении.
  • Обнаружение изолированно антител класса IgG может быть признаком иммунитета к данной инфекции, хотя также это может указывать и на хроническую болезнь. При наличии хронической формы заболевания большую роль играет количество антител и их динамика. Такие исследования проводят с интервалом примерно в 2 недели.
  • Когда в крови присутствуют сразу антитела IgA и IgM, то это может говорить о первичном инфицировании. Обнаружение IgA изолированно тоже является последствием первичного поражение инфекцией организма.

При обнаружении антител IgA вместе с антителами IgG означает активацию хронической формы инфекции. Иммуноглобулины появляются в крови через 2 недели после обострения болезни.Авидность антител является показателем прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами). Это дополнительный этап в диагностике методом ИФА.

Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности. А также, можно оценить все риски внутриутробного инфицирования ребенка.

Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении. Высокая авидность антител свидетельствует о хронической форме болезни, либо же является признаком стойкого иммунитета.

Особенности появления антител в крови грудных детей

Если у детей в возрасте до года или до 1,5 лет в крови обнаружены материнские IgG, то это значит, что антитела проникли в организм ребенка через плаценту во время вынашивания плода. Этот признак не может свидетельствовать об инфицировании малыша, а является передавшемся от матери иммунитетом к инфекции.

Но, если в маленьком организме обнаружено иммуноглобулины класса IgM, которые из-за своего веса не могут проникнуть через плаценту к малышу, то это является признаком инфицирования. Заражение могло произойти уже после рождения или же в период внутриутробного развития.

Заболевания выявляющиеся ИФА диагностикой

Перейдем к рассмотрению того, какие заболевания и какие биологически активные вещества выявляются методом иммуноферментного анализа. Вещества, выявляемые методом иммуноферментного анализа, представлены в таблице.

Гормоны и маркеры заболеваний щитовидной железы Тиреопероксидаза (ТПО)
Тиреоглобулин (ТГ)
Тиреотропный гормон (ТТГ)
Тироксин (Т4)
Трийодтиронин (Т3)
Свободный тироксин (Т4)
Свободный трийодтиронин (Т3)
Диагностика репродуктивной функции Лютеинизирующий гормон (ЛГ)
Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ)
Хорионический гонадотропин (ХГ)
Пролактин
Прогестерон
Эстрадиол
Тестостерон
Кортизол
Стероид связывающий глобулин (ССГ)
Альфафетопротеин (АФП)
Онкомаркеры Хорионический гонадотропин (ХГ)
Простатспецифический антиген (ПСА)
СА – 125
СА – 19.9
CYFRA – 21-1
М – 12 (СА – 15.3)
MUC – 1 (M – 22)
MUC1 (M – 20)
Альвеомуцин
К – цепь
L – цепь
Фактор некроза опухолей (ФНОα)
γ – интерферон
Раково-эмбриональный антиген (РЭА)
Диагностика инфекционных заболеваний Токсоплазма (IgG, IgM)
Краснуха (IgG, IgM)
Цитомегаловирус (IgG, IgM)
Герпес (IgG, IgM)
Туберкулез (IgG, IgM)
Корь (IgG, IgM)
Гепатит Д, Е, А (ВГД, ВГЕ, ВГА)
Гепатит С (ат ВГС, ВГСсore)
Гепатит В (НВs, НВе НВсore)
Уреаплазма (IgG, IgM)
Микоплазма (IgG, IgM)
Хламидия (IgG, IgM)
Микоплазма (IgG)
Сифилис (IgG)
Аспергиллёз (IgG)
Лямблии (IgG)
Helicobacter Pylori (IgG)
Псевдотуберкулез (IgG, IgM)
Кандида (IgG)
Герпес (IgG, IgM)
Эпштейн-Барр (IgG, IgM)
Цитомегаловирус (IgG, IgM)
Диагностика аутоиммунных заболеваний и определение иммунного статуса IgE – общий
С-реактивный белок (СРБ)
Глиадин (IgG, IgA)
IgG4
Общий IgG
IgG2
Общий IgA
Секреторный IgA
Общий IgD
Общий IgМ
Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
Маркеры заболеваний сердца Тропонин I

В таблице приведен далеко не полный перечень анализов (только наиболее распространенные), выполняемых с помощью иммуноферментного анализа. Привести же весь список не представляется возможным, поскольку он будет очень большим и постоянно пополняющимся. Помимо лабораторной диагностики метод иммуноферментного анализа широко используется в научных исследованиях.

Иммуноферментный анализ

— Определение антител к вирусу простого герпеса 1,2 типа IgM и IgG

— Определение антител к цитомегаловирусу IgM и IgG

— Определение антител к вирусу краснухи IgM и IgG

— Определение антител к Toxoplasma gondii IgM и IgG

Нередко, заражение женщины инфекциями TORCH-комплекса во время беременности (наличие в крови только антител IgM) является показанием для ее прерывания.

Чтобы определить наличие сифилиса, необходим иммуноферментный анализ. Кровь пациента берется из вены, натощак. Для проведения анализа используется панель со специфичностью АТ классов A, M, G. Антитела при сифилисе производятся в конкретной последовательности, поэтому благодаря ИФА можно точно определить, когда настало заражение и какая стадия болезни на данный момент у пациента. На планшете ответ на анализ на сифилис будет иметь следующий вид:

  • отрицательный результат оставит лунки бесцветными;
  • положительный результат окрасит лунки в желтый цвет.

Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна зависимости связанных между собой антигенов и антител.

Такие серьезные заболевания, как цитомегаловирус и хламидиоз, возможно определить иммуноферментным анализом с точностью до дня инфицирования, а также в какой стадии данное заболевание сейчас находится, какое лечение будет наиболее эффективно.

Предлагаем ознакомиться:  Причины и лечение трихомониаза у мужчин лекарства

Когда в анализе определяется хламидия, появляются антитела класса А, М, G:

  • антитело (IgM) определяется в первые дни инфицирования;
  • антитело (IgA) определяется после 30 дня инфицирования;
  • антитело (IgG) определяется независимо от времени инфицирования. Иммуноглобулины этого вида находятся в организме и помогают отслеживать лечение.

С цитомегаловирусом сложнее. ЦМВ проявляется в IgM, когда заболевание уже циркулирует в организме больше месяца. И наоборот — IgG определяет развитие начальной (острой) стадии болезни или повторное реинфицирование вирусом. При исследовании иммуноферментного анализа на IgG необходимо учитывать авидность антитела IgG.

Благодаря изобретению иммуноферментного анализа люди получили возможность диагностировать огромное количество опасных заболеваний. Сейчас можно сдать кровь (берется только кровь из вены) в любой диагностической лаборатории и получить достоверный результат в короткие сроки.

Несомненно, иммуноферментный анализ имеет ряд преимуществ по сравнению с другими диагностическими методиками:

  1. С его помощью можно определить даже незначительное наличие патогенных организмов, что говорит о высокой чувствительности теста.
  2. Возможность обнаружения заболевания на самых ранних стадиях, что значительно повышает шанс на благополучное излечение.
  3. Простота и удобство взятия биологического материала. Такой анализ проводят как в частных лабораториях, так и в государственных. При необходимости материал может взять медсестра у пациента дома.
  4. Для анализа требуется совсем незначительный объем биоматериала.
  5. Быстрое получение результата. Современное медицинское оборудование позволяет выполнить анализ в течение суток.
  6. Возможность обнаружения скрытых бессимптомных форм инфекции.
  7. Доступность исследования.
  8. При необходимости возможно проведение массовых обследований данным методом.
  9. Существует возможность отслеживания протекания заболевания и эффективности назначенного лечения, так как можно проводить анализ методом ИФА многократно абсолютно безопасно для пациента.
  10. Автоматизация этапов проведения анализа, что исключает человеческий фактор и повышает достоверность результатов.
  11. Реагенты для проведения ИФА хранятся достаточно долго – около года.
  12. Проведение анализа возможно при колебаниях температуры окружающей среды.

Иммуноферментный анализ крови применяют для определения разных инфекционных заболеваний, гормональных состояний, делают аллергопробы. А именно:

  • определяют уровень гормонов щитовидной железы;
  • показатели репродуктивной гормональной панели;
  • онкомаркеры;
  • обнаруживают возбудителей инфекционных заболеваний, таких как цитомегаловирус, гепатит, токсоплазма, краснуха, корь, туберкулез, хламидия, сифилис, микоплазма, уреплазма, кандида, лямблии и даже ВИЧ;
  • диагностируют аутоиммунные заболевания. В том числе часто используют для исследования гормонов щитовидной железы иммуноферментный анализ: ТТГ, ТГ, Т3 и Т4.

Кроме диагностических целей, метод иммуноферментного анализа применяют в научно-исследовательской медицинской деятельности.

Анализ крови на иммуноферментный анализ показано проводить при подозрении на возникновение следующих патологий:

  • онкология;
  • вирусные гепатиты (при всех типах вируса);
  • герпетические поражения слизистой или кожи;
  • некоторые инфекционные процессы (сальмонеллез, корь, энцефалит, дизентерия);
    сифилис;
  • инфекции, передающиеся половым путем (гонорея, хламидиоз, микоплазмоз и др.);
  • атопические процессы (аллергии);
  • цитомегаловирус;
  • эндокринные сбои;
  • иммунодефицит;
  • бесплодие;
  • глистные инвазии.

Также ИФА анализ крови позволяет спрогнозировать течение некоторых неинфекционных заболеваний:

  • инфаркта;
  • инсульта;
  • неврологических расстройств;
  • почечных патологий.

Также с профилактической целью проводят ИФА во время медосмотров.

1) Инфекционные болезни

  • вирус иммунодефицита человека,
  • вирусные гепатиты А, В, С, D, E и другие,
  • цитомегаловирусные инфекции,
  • инфекции герпеса первого и второго типа,
  • токсоплазмоз;
  • инфекцию краснухи,
  • мононклеоз, инфекция Эпштейн-Барра,
  • инфекцию кори,
  • бруцеллез,
  • псевдотуберкулез,
  • салмонеллез,
  • дизентерия или шигеллез,
  • аспергиллез,
  • энцефалит,
  • паразитозы, например, лямбиоз, трихинеллез, токсокароз, описторхоз и некоторые другие,
  • инфекции, передающиеся половым путем: сифилис, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз,
  • хеликобактерная инфекция.

2) Показатели состояния человеческого иммунитета и маркеры аутоиммунных болезней.3) Онкологические заболевания (хронический гонадотропин, простатспецифический антиген, альвеомуцин, фактор некроза опухоли, раково-эмбриональный антиген и другие).4) Эндокринные заболевания.5) Нарушения работы репродуктивной системы.

В список включены не все заболевания, которые могут быть диагностированы с помощью ИФА, этот перечень можно продолжать.

Специалист может назначить исследование с целью:

  • Выявления ЗППП (микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидии и т.д.).
  • Обнаружения вирусных болезней (герпес, цитомегаловирус).
  • Выявления аллергических реакций, раковых опухолей.
  • Проблемы с щитовидной железой, концентрацию ТТГ в норме и патологии.
  • Обнаружения распространения паразитов.
  • Оценки эффективности терапии, назначенной ранее.

Выявление паразитов методом ИФА

Исследование ИФА нашло широкое применение для обнаружения паразитов в организме. ИФА-тесты позволяют выявить паразитов при спровоцированной выработке антител и антигенов к ним, оценить масштаб их расселения, определить вид. Совместно с другими вспомогательными методиками (анализ на яйцеглист, например) точность исследования доходит до 99%.

Фазы иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ, как видно из названия, состоит из двух разных компонентов – иммунной реакции и ферментативной реакции. Иммунная реакция производит связывание биологических молекул, элементов клетки или микроорганизма, которые собственно и пытаются обнаружить, а ферментная реакция позволяет увидеть и измерить результат иммунологической реакции.

То есть иммунная реакция – это часть комплексной методики, которая собственно обнаруживает искомый микроб. А ферментная реакция – это та часть комплексной методики, которая позволяет перевести результат иммунной реакции в форму, видимую глазом, и доступную для измерения рутинными химическими методиками. Исходя из такой структуры метода иммуноферментного анализа, разберем обе его части по отдельности.

В прямом иммуноферментном анализе используют антитела к выявляемому антигену, соединенные со специфической меткой. Эта специфическая метка и есть субстрат ферментативной реакции.

Наборы для иммуноферментного анализа

Прикрепление антигенов к поверхности лунки и соединение антигена с антителом

Как проходит прямой иммуноферментный анализ? Берется биологический материал (кровь, соскобы со слизистых, мазки) и помещается в специальные лунки. Биологический материал оставляют в лунках на 15-30 минут, чтобы антигены могли приклеиться к поверхности лунок. Далее в эти лунки добавляют антитела к выявляемому антигену.

Это значит, что выявляя антигены, например, сифилиса, добавляются антитела против антигенов сифилиса. Эти антитела получают промышленным способом, а лаборатории покупают уже готовые наборы.Данную смесь исследуемого материала и антител оставляют на некоторое время (от 30 минут до 4-5 часов), чтобы антитела смогли найти и связаться со «своим» антигеном.Чем больше в биологической пробе антигенов, тем больше антител свяжется с ними.

Удаление «лишних» антител

Как было указано, антитела к тому же связаны со специфической меткой.Поскольку антитела добавляются в избытке, то не все они свяжутся с антигенами, а если антигена вообще нет в пробе, то, соответственно, ни одно антитело не свяжется с искомым антигеном. Для того чтобы убрать «лишние» антитела, содержимое из лунок просто выливают.

Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения

Далее начинается второй этап – ферментативная реакция. В промытые лунки добавляют раствор с ферментом и оставляют на 30-60 минут. Данный фермент имеет сродство к веществу (специфической метке), с которым связаны антитела. Фермент проводит реакцию, в результате которой эта специфическая метка (субстрат) превращается в окрашенное вещество (продукт).

Затем методом колориметрии находят концентрацию этого окрашенного вещества. Поскольку данная специфическая метка связана с антителами, значит, концентрация окрашенного продукта реакции равна концентрации антител. А концентрация антител равна концентрации антигенов. Таким образом, в результате проведенного анализа мы получаем ответ, какова концентрация выявляемого микроба или гормона.

Именно так проходит прямой иммуноферментный анализ. Однако сегодня чаще используют непрямой иммуноферментный анализ, поскольку чувствительность и точность непрямого выше, чем прямого. Итак, перейдем к непрямому иммуноферментному анализу.

В непрямом иммуноферментном анализе два этапа. При проведении первого этапа используют немеченые антитела к выявляемым антигенам, а во втором этапе применяют меченые антитела к первым немеченым антителам. То есть получается не прямое связывание антитела с антигеном, а двойной контроль: связывание антител с антигеном, после чего связывание вторых антител с комплексом антитело антиген. Как правило, антитела для первого этапа – мышиные, а для второго – козьи.

Фиксация антигенов на поверхности лунки и связывание антигена с немеченым антителомТак же как и для прямого иммуноферментного анализа производится забор биологического материала – кровь, соскобы, мазки. Исследуемый биологический материал вносят в лунки и оставляют на 15-30 минут для приклеивания антигенов к поверхности лунок.

Затем в лунки вносят немеченые антитела к антигенам и оставляют на промежуток времени (1-5 часов), чтобы антитела связались со «своими» антигенами и образовали иммунный комплекс (первый этап). После чего удаляют «лишние», не связавшиеся антитела, путем выливания содержимого лунок. Производят промывку специальным раствором для полного удаления всех не связавшихся антител.

Предлагаем ознакомиться:  Травы для печени при гепатите С: эффективны ли они

Связывание меченого антитела с комплексом антиген немеченое антителоПосле чего берут вторые антитела – меченые, добавляют в лунки и опять оставляют на некоторое время – 15-30 минут (второй этап). За это время меченые антитела связываются с первыми – не мечеными и образуют комплекс – антитело антитело антиген.

Ферментативная реакция – образование окрашенного соединенияПосле чего вносят фермент, осуществляющий реакцию превращения «метки» в окрашенное вещество. Окраска развивается в течение 5-30 минут. Затем проводят колориметрию и вычисляют концентрацию окрашенного вещества. Поскольку концентрация окрашенного вещества равна концентрации меченых антител, а концентрация меченых равна концентрации немеченых антител, которая, в свою очередь равна концентрации антигена.

Таким образом, получаем концентрацию выявляемого антигена.Такой двойной контроль в виде использования двух видов антител позволил повысить чувствительность и специфичность метода иммуноферментного анализа. Несмотря на удлинение времени проведения анализа и включение дополнительных этапов, эти потери компенсируются точностью результата. Именно поэтому в настоящее время подавляющее большинство методик иммуноферментного анализа – это непрямой иммуноферментный анализ.

Чтобы обеспечить максимальную точность результатов, нужно следовать определенным правилам подготовки к исследованию. Анализ для лабораторной диагностики методом ИФА, как правило, сдается утром из локтевой вены. Сдавать кровь необходимо строго натощак. Кроме этого простого предписания, следует выполнять следующие рекомендации по подготовке:

  • за 24 часа до исследования необходимо исключить прием алкоголя и курение;
  • избегать тяжелых физических нагрузок;
  • пребывать в спокойном состоянии;
  • избегать нервного напряжения;
  • сдавать кровь на ИФА не ранее, чем через 10 дней после отмены лекарств;
  • предупредить врача о приеме необходимых лекарств.

Результат иммуноферментного анализа

Кроме того, за несколько дней до сдачи анализа рекомендуется придерживаться диеты. При этом из рациона исключить жирные продукты, жареную пищу. Перед анализом на вирусные гепатиты из рациона исключить не только жирное и жареное, но и цитрусовые, а также оранжевые овощи.

Следует отметить, что на результаты определенного спектра гормональных исследований влияет такой фактор, как фаза менструального цикла. Необходимость сдавать анализ в ту или иную фазу менструального цикла следует заранее обговорить с лечащим врачом. В противном случае можно получить неожиданные показатели. Так, например, нормальный уровень лютеинизирующего полового гормона у женщин варьируется в зависимости от дня цикла:

  • 1-12 день — 2-14 мЕд/л;
  • 12-14 день — 24-150 мЕд/л;
  • с 15 дня до начала нового цикла — 2-17 мЕд/л.

В зависимости от предполагаемого заболевания, из набора для иммуноферментного анализа используют необходимый антиген, который во время химической реакции при наличии инфекции свяжется с патогенной флорой. Этот процесс называется проведением иммунной реакции.

Затем для того, чтобы визуально определить результат исследования, проводят ферментативную фазу ИФА. Она предполагает окрашивание материала с помощью специальных реагентов. В данном исследовании применяют такие ферменты, как щелочная фосфатаза, пероксидаза и авидин. В зависимости от получившегося цвета в процессе проведения химических реакций и определяют результат иммуноферментного анализа.

Иммуноферментный анализ следует проводить, придерживаясь всех рекомендаций, так как на результаты исследования влияют внешние факторы. Например, важно сдавать венозную кровь натощак утром (до 11 часов). За 2 недели до предполагаемого забора материала нужно прекратить прием каких-либо лекарственных препаратов, особенно гормональных.

Иммуноферментный анализ отскрининга на докомплексной диагностики

Стоимость диагностического исследования имеет большой диапазон и зависит от вида анализа и определяемого антигена, так как исходя из этих факторов рассчитывается стоимость реагентных наборов и определяется сложность проведения анализа. Но в большинстве случае является доступным многим пациентам иммуноферментный анализ. Цена его составляет от 300 р. до 2000 р.

ИФА – доступный, быстрый и высокоэффективный метод диагностики большого перечня заболеваний. Но расшифровкой результатов и постановкой диагноза имеет право заниматься только квалифицированный медицинский работник.

ИФА, или иммуноферментный анализ крови, дает возможность определить специфические антитела (иммуноглобулины) к определенному виду возбудителя. Метод ИФА основан на следующем:

  • в ответ на внедрение микроорганизма иммунная система начинает вырабатывать антитела;
  • иммунокомплексы отличаются специфичностью и уничтожают только чужеродные клетки;
  • при добавлении в сыворотку крови больного экстракта возбудителей, если имеются антитела, образуется стандартное соединение: антитело-антиген, при этом происходит активное выделение ферментов.

О положительном или отрицательном тестировании в лаборатории судят по тому, произошла ли реакция в плазме после добавления к ней возбудителя, и насколько интенсивным был процесс.

Норма для здорового человека – это единичные иммунокомплексы или их отсутствие.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на антитела к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов с определением авидности IgG и IgG к предранним белкам вируса.

  • Диагностика вирусных заболеваний: гепатиты, герпес, Эпштейн-Барр вирус, цитомегаловирус и др;
  • инфекции передающиеся половым путем: хламидиоз, гонорея, трихомонада, микоплазма, уреаплазма;
  • сифилис; эндокринология (определение уровня гормонов);
  • онкомаркеры (диагностика онкологических заболеваний); иммунология (диагностика иммунодефицита);
  • аллергология (диагностика и лечение аллергий).

Область применения ИФА

Применение иммуноферментного анализа очень обширно, а область его применения охватывает почти всю медицину. Особенно важен ИФА в онкологии, когда возможно определить начало заболевания на самых ранних стадиях.

В клинической диагностической лаборатории существует множество панелей иммуноферментного анализа для выявления и ранней диагностики инфекционного процесса, гормональных сбоев, аутоиммунных заболеваний, венерических болезней. ИФА-диагностикой пользуются при тестировании лекарственных препаратов, их воздействия на организм человека. Область применения ИФА-диагностирования весьма обширна и может применяться для выявления:

  • нарушения репродуктивной функции;
  • нарушения в щитовидной железе;
  • нарушения иммунной системы;
  • инфекционные заболевания;
  • маркеры онкологических заболеваний.

И это список самых распространенных анализов. Полный список иммуноферментного анализа довольно большой и постоянно обновляется.

ИФА используют в таких диагностических целях:

  • диагностика вирусных инфекций (гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция и др.);
  • передающиеся половым путем инфекции (гонорея, хламидиоз, уреаплазмоз и т.п.);
  • сифилис;
  • онкомаркеры;
  • диагностика аллергии, а также иммунодефицитных состояний.
СУЩЕСТВУЮТ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ, НЕОБХОДИМА КОНСУЛЬТАЦИЯ СПЕЦИАЛИСТА!

Определение антигенов используют для определения родовой и видовой принадлежности микроорганизмов. Данный метод исследования применяется в урологии и венерологии. Кровь для серологического анализа крови берется утром натощак из вены.

Показания для лабораторной диагностики

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

  • диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний: IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С; IgG к ВИЧ; Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции; Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр; Ig M и IgG к герпетическим инфекциям; Ig M и IgG к токсоплазмозу;
  • Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям; IgG к паразитарным заболеваниям; Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем; IgG к хеликобактерной инфекции. Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других). Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Стоимость анализа

Складывается от количества нужных маркеров. Чем больше маркеров, тем выше цена.

Цена на определение антител к

  • цитомегаловирусу Igm/IgG варьируется в пределах 350-700 рублей,
  • к микоплазме 340-520 рублей,
  • к кандиде 320-450 рублей,
  • Анти-Хламидия tr. IgA Анти-Хламидия tr. IgG 1000-1300,
  • антитела класса IgM к Хламидии 500-600 рублей и т.д.
  • Забор крови в среднем составляет 150-250 рублей.

Некоторые клиники и лаборатории предоставляют услугу отправки результатов по электронной почте. Услуга бесплатна.

Она характеризуется широким спектром действия, быстротой и удобством проведения, высокой точностью результатов, приемлемой стоимостью. Она востребована, поэтому доступна в разных клиниках и лабораториях города.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:

Отправить ответ

avatar
  Subscribe  
Notify of
Adblock detector