Лабораторная диагностика вирусных гепатитов С В А

Рассмотрим применение методов диагностики для разных гепатитов

Воспалительно-дистрофическое поражение печени на начальной стадии проявляется слабо. Патология подтверждается анализами. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов — наиболее достоверный метод обнаружения заболевания. Она позволяет выявить в организме специфические антигены и антитела, появившиеся вследствие активного размножения патогенных клеток. Благодаря лабораторным исследованиям становится известной генетическая информация вирусов.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — основной вид лабораторной диагностики. Обследование направлено на изучение ДНК возбудителя заболевания. Благодаря ПЦР-диагностике выявляются маркеры (антигены и антитела) вирусов. Это дает возможность определить вид патологии.

Гепатит А на начальной стадии характеризуется наличием маркеров анти-HAV IgM. К моменту завершения инкубационного периода у человека вырабатывается иммунитет, а в сыворотке обнаруживаются анти-HAV-total. Лабораторная диагностика гепатита В позволяет выявить HBsAg, анти-HBs, HbcorA, анти-Hbcor IgM, анти-Hbcor IgG, HbeAg, анти-Hbe.

Обязательным является биохимический анализ крови. Он назначается всем пациентам, у которых есть подозрения на гепатит. При воспалении печени в крови меняется концентрация глобулинов, фибриногена, билирубина, альбумина, протромбина. В некоторых случаях врач отправляет пациента на коагулограмму. Анализ помогает определить гепатит С. Если свертываемость крови понижена или замедлена, существует вероятность воспалительного процесса в печени.

Современные методы лабораторного исследования включают в себя печеночные пробы, а именно:

  • СДГ;
  • ЛДГ;
  • ГЛДГ;
  • АСТ;
  • ГГТ;
  • АЛТ;
  • тимоловую пробу;
  • щелочную фосфатазу.

Биохимический анализ крови и печеночные пробы — это косвенное свидетельство гепатита В и С, A и D. Показатели данных лабораторных исследований меняются и при других болезнях печени. Врач ставит диагноз в основном по результатам ПЦР-диагностики. Наличие конкретных маркеров подтверждает болезнь и позволяет выявить ее вид и форму протекания.

Важно вовремя отличить вирусный гепатит от лучевого, аутоиммунного и токсического. Для этого проводится дифференциальная диагностика. На начальной стадии вирусное поражение печени часто путают с алкогольным. Заболевания развиваются по одинаковой схеме. При вирусном гепатите желтушность кожи и слизистых оболочек присутствует длительное время. Болевой и диспепсический синдромы практически отсутствуют. Температура тела повышается редко.

Общий анализ крови играет важную роль в дифференциальной диагностике. При алкогольном гепатите отмечается ярко выраженный лейкоцитоз. Нейтрофильная формула сдвигается влево. Вирусный гепатит А (B, C или D) характеризуется вялотекущим воспалительным процессом, поэтому количество лейкоцитов увеличивается незначительно.

Дифференциальная диагностика включает в себя также биопсию печени. Цель процедуры — исследовать живую ткань органа. Во время биопсии определенное количество клеток печени забирается через иглу в шприц.

Точно поставить диагноз вирусного гепатита и определить его тип возможно только с помощью лабораторной диагностики.

Вирусное поражение печени можно заподозрить при:

  • Гриппоподобных симптомах (слабость, повышение температуры, боли в мышцах). Иногда они бывают единственными проявлениями острой фазы болезни, особенно при инфицировании гепатитом С или G.
  • Симптомах, схожих с ревматоидными заболеваниями – ломоте и боли в суставах.
  • Болях в подреберье справа, желтухе, потемнении мочи и обесцвечивании кала.
  • Периодически беспокоящей тошноте, рвоте, беспричинной слабости, которая усиливается к вечеру.

Поэтому рекомендуется провести анализ на гепатиты В и С, D и G, если беспокоят подобные симптомы и нет других известных причин их появления.

Универсальный биологический материал для выявления вирусных гепатитов – это венозная кровь.

Проходить обследование при подозрении на болезни печени необходимо под руководством специалиста. Доктор, оценив жалобы и симптомы, предоставит Вам перечень тестов, которые необходимо пройти. Окончательный диагноз формулируется только на основании совокупности данных осмотра, лабораторной и инструментальной диагностики:

  • Определение факта наличия вируса или антител к нему, а также оценка «вирусной нагрузки», выявление особенностей вируса (иммунологический метод и метод ПЦР).
  • Определение биохимических показателей состояния печени. Оцениваются печёночные ферменты АЛТ и АСТ, белок, билирубин, щелочная фосфатаза и т.д. Изменения этих показателей дают представление о признаках разрушения клеток печени и степени нарушения её нормальных функций.
  • Визуализация состояния печёночной ткани. Обычно проводится с помощью УЗИ, МРТ, эластография (аппаратом «Фиброскан»). Позволяет видеть площадь поражения органа, признаки фиброзных изменений, появление новообразований. Для более подробной оценки состояния органа проводят биопсию печени
  • Развёрнутый общий анализ крови, оценка свёртываемости (коагулограмма). Изменения этих показателей также могут дать врачу важную информацию о состоянии печени, поскольку данный орган принимает участие в синтезе компонентов системы свёртывания крови.
  • Дополнительно: анализ на гормоны, анализы на аутоиммунные заболевания. В процессе планирования и проведения терапии доктору может понадобиться оценить функцию вашей щитовидной железы и другие показатели эндокринных функций, а также выявить наличие ревматоидного фактора.
Предлагаем ознакомиться:  Диагностика гепатитов А В С, сдать кровь на гепатит и как проявляется

— метод позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК даже в тех случаях, когда с помощью других способов это сделать невозможно;

— метод обладает высокой специфичностью (до 100 %). Она обусловлена тем, что в исследуемом «материале определяется уникальный фрагмент нуклеиновой кислоты, характерный только для данного возбудителя или гена;

— возможность проведения не только качественной (наличие), но и количественной (концентрация) оценки содержания нуклеиновой кислоты. В настоящее время с помощью коммерческих тест-систем можно определять несколько сот копий в исследуемом образце;

— высокая технологичность и автоматизация метода позволяют врачу получить результаты исследования и ознакомить с ними пациента в день проведения анализа;

— ПЦР позволяет выявить возбудителя в организме еще до развития заболевания, например, в инкубационном периоде;

— для проведения ПЦР—анализа достаточен минимальный объем пробы (до нескольких микролитров);

— ПЦР-анализ позволяет одновременно диагностировать несколько возбудителей заболеваний в одной пробе без ущерба для чувствительности или специфичности результата;

— полученные результаты ПЦР можно вносить в компьютерные информационные носители или фотографировать для дальнейшей оценки независимыми экспертами.

— высочайшие требования к оснащению лаборатории, качеству тест-систем и строжайшее соблюдение регламента исследования во избежание получения ложных результатов. Решение проблемы качества анализов возможно при соответствующей квалификации персонала и обязательной сертификации лаборатории;

— неоднозначная оценка положительного результата ПЦР. Именно этот факт зачастую является необоснованным аргументом врачей-практиков для сомнения в полученном результате и эффективности метода ПЦР. Например, у лиц с обнаруженной в крови методом ПЦР ДНК возбудителя клинически заболевание может развиться не всегда.

В данной ситуации при оценке ПЦР-анализа следует говорить об инфицированное больного, а не о развитии инфекционной болезни. Метод ПЦР — анализа позволяет определять наличие или отсутствие возбудителя, в значительной мере отвечает на вопрос «лечить не лечить», а также дает возможность оценить качество лечения путем контроля наличия или отсутствия возбудителя.

Для каждого вида возбудителя вирусных гепатитов разработаны тест-системы, но наиболее ценным метод ПЦР оказался в диагностике вирусов гепатитов В, С, D, G. Метод ПЦР является крайне важным для диагностики гепатита В. Это связано с тем, что среди множества разновидностей этого вируса встречаются мутантные (с измененными признаками), которые не определяются обычными серологическими тестами.

Лабораторная диагностика вирусных гепатитов С В А

Метод ПЦР-анализа позволяет выявить, и какой форме находится вирус гепатита 15, способен ли он к самостоятельному размножению или интегрировался (встроился) в ДНК клетки-хозяина. Это имеет крайне важное клиническое значение, так как при интегративной форме этой инфекции человек не заразен для окружающих (безопасность для полового партнера, профессиональная пригодность, отсутствует риск вертикальной передачи вируса от матери к плоду и т. п.).

Кроме того, таким пациентам не показана противовирусная терапия, более того — она даже опасна. Вместе с тем, при интегративной форме инфекции резко возрастает (более чем в 200 раз) вероятность развития рака печени. Таким людям необходимо не менее одного раза в год проходить комплексное клинико-лабораторное и инструментальное обследование.

Метод ПЦР может выступать в качестве арбитра для определения необходимости начала лечения и контроля его эффективности. Быстрое исчезновение из крови ДНК вируса гепатита В является прямым и надежным тестом успешного исхода противовирусного лечения.

Таким образом, определение ДНК вируса гепатита В в плазме крови является важнейшим анализом, который в совокупности с другими лабораторными исследованиями позволяет объективно диагностировать инфекцию, определять характер инфекционного процесса, выступать в качестве критерия в проведении терапии и оценки ее эффективности.

Серологические маркеры Период болезни Период выздоровления После выздоровления
Инкубационный Острая фаза
Начало 4-12 нед. Конец 1-2 нед. 2 нед. 3 мес. 3-6 мес. Годы
ДНК
HBs-антиген /-
НВе-антиген
Антитела IgM /-
Антитела НВс
Антитела НВе /-
Антитела HBs -/
Серологические маркеры Период болезни Период выздоровления После выздоровления
Инкубационный Острая фаза
Начало 4-12 нед. Конец 1-2 нед. 2 нед. 3 мес. 3-6 мес. Годы
РНК
Антитела IgM
Антитела IgG

Биохимический анализ крови

Сейчас это «золотой стандарт» для диагностики вирусных гепатитов B, C, D, G. Он нацелен на обнаружение ДНК или РНК возбудителя в крови. Метод обладает высокой точностью и позволяет не только обнаружить факт инфицирования, но и оценить количество вирусных частиц в крови, а также определить генотип вируса (это особенно актуально для гепатита С). Такие уточнения бесценны при выборе правильной схемы лечения.

Предлагаем ознакомиться:  Диагностика сифилиса на разных стадиях

Биохимический анализ крови пациентов давно вошел в практику клинических лабораторий. Совокупность получаемых данных о показателях обмена биллирубина, сывороточных белках и ферментах позволяют обнаружить воспалительные процессы, происходящие в организме человека и предположить их локализацию. Эти критерии не специфичны и не характеризуют этиологию вирусных гепатитов, вместе с тем существенны для оценки функционального состояния печени.

2. Вопросы, разбираемые на лекции

Классификация и основные характеристики вирусов,

вызывающих острые и хронические гепатиты.

Парэнтеральные гепатиты. Особенности строения и

репродукции вируса гепатита В. Основные маркеры,


обнаруживаемые в материалах от больных.

Гепатит D. Особенности патогенеза и клиники

коинфекции и суперинфекции вирусом гепатита D.

Интерпретация результатов.

Строение и репродукция вирусов гепатита С и G.

Вирусные маркеры. Специфичность, чувствительность и


прогностическое значение результатов отдельных

методов.

Энтеральные гепатиты: пути заражения, особенности

патогенеза и клинических проявлений гепатитов А и Е.

Отбор образцов для анализов. Основные

вирусологические маркеры энтеральных гепатитов.

Вирусные гепатиты – группа

полиэтиологичных

антропонозных вирусных


инфекций, характеризующихся

поражением печени.

Показатель «чувствительности»

Одним из важнейших критериев диагностической эффективности любого лабораторного анализа является показатель «чувствительности». При этом следует различать аналитическую и диагностическую чувствительность. Аналитическая чувствительность, применительно к ПЦР, представляет собой то минимальное количество копий ДНК или РНК в 1 мл раствора образца, которое может быть определено данной тест-системой.

Большинство коммерческих тест-систем позволяет обнаружить в биологической пробе искомую нуклеиновую кислоту, даже если ее концентрация составляет несколько сот копий в 1 мл образца. С этим связано общее положение, определяющее клиническую пригодность любых лабораторных способов диагностики или тест-систем — диагностическая чувствительность метода не должна быть ниже 95–98 %.

Второй универсальный критерий лабораторной эффективности — «специфичность», которая определяется процентом здоровых людей, имеющих истинно отрицательные результаты анализа. Метод ПЦР обладает высочайшей специфичностью, которая достигает 99-100 %.

Диагностическая чувствительность и специфичность ПЦР сопоставимы, а зачастую и превосходят показатели, обеспечиваемые другими методами, которые являются «золотым стандартом» в диагностике инфекционных заболеваний.

Результаты ПЦР-анализа можно получить в течение одного рабочего дня, при этом отобранные для анализа пробы могут храниться (накапливаться) в течение даже нескольких недель при соблюдении соответствующих температурных норм. Проведенная недавно в нескольких зарубежных исследовательских центрах суммированная оценка чувствительности различных методов диагностики показала, что ИФА имеет чувствительность 50–70 %, а ПЦР — от 90 до 100 %.

ПЦР, по сравнению с ИФА и другими способами, обладает двумя важными преимуществами: высокой чувствительностью и непродолжительностью анализа по времени, то есть «актуальностью» получения результата исследования врачом и пациентом.

Оценить у пациента состояние обмена билирубина можно на основании биохимического анализа крови, мочи и кала. Свободный билирубин является производной гемоглобина, высвобождающегося в процессе гемолиза эритроцитов. В физиологических условиях каждые сутки гемолизируется примерно 1% циркулирующих эритроцитов, из которых образуется 200-250 мг билирубина.

Основная часть билирубина поступает в кровяное русло из клеток системы мононуклеарных фагоцитов селезенки и костного мозга. Билирубин нерастворим в воде, поэтому в крови его перенос осуществляют неспецифические транспортные белки – альбумины. Свободный билирубин является токсичным соединением, способным проникать через гемато-энцефалический барьер, вызывая энцефалопатии.

Детоксикация билирубина происходит в клетках печени, где к нему присоединяется глюкуроновая кислота, образуя глюкурониды билирубина. Эти соединения уже не токсичны и водорастворимы, что облегчает их выведение из организма в составе желчи. В кишечнике под действием бактериальных ферментов образуются две группы продуктов распада билирубина – уробилиногены и стеркобилиногены, основная часть которых выводится с калом.

Предлагаем ознакомиться:  Можно ли работать с гепатитом с

В нормальных физиологических условиях почки в выведении билирубина не участвуют.

Билирубин в крови здорового человека содержится в концентрации 1,7 – 17,1 мкмоль/л и представлен двумя фракциями: нерастворимый билирубин, связанный с альбумином – непрямой билирубин, и растворимые глюкорониды билирубина – прямой билирубин.

В норме их соотношение составляет 3 : 1.

При гепатитах повреждаются клетки печени и, вследствие этого, снижается продукция желчи. Кроме того, в результате повреждения паренхимы печени желчь поступает не только в желчные канальцы, но и в кровь. Эти процессы приводят к увеличению общего билирубина крови за счет обоих его фракций.

Отмечено, что уже в конце преджелтушного периода у части больных на фоне нормального общего билирубина начинает расти фракция прямого билирубина, что является ранним показателем цитолитических процессов в печени. В моче начинают выявляться билирубин и уробилины, а концентрация стеркобилина в кале резко снижается (таблица 1).

Таблица 1. Соотношение показателей обмена билирубина в норме и при развитии печеночной желтухи.

Показатели

Нормальные значения

Печеночная желтуха

Общий билирубин сыворотки крови

1,7 – 17,1 мкмоль/л

Значительное повышение

Прямой билирубин сыворотки крови

до 3,4 мкмоль/л

Повышение

Непрямой билирубин сыворотки крови

1,7 – 12,7мкмоль/л

Повышение

Реакция мочи на билирубин и уробилин

Отрицательная

Положительная

Реакция кала на стеркобилин

Положительная

Отрицательная

Следует отметить, что показатели обмена билирубина для диагностики вирусного гепатита играют роль только при развитии желтухи. Безжелтушная форма и преджелтушная фаза вирусных гепатитов в своем большинстве остаются нераспознанными.

Оценка активности ферментов.

Определение активности аминотрансфераз сыворотки (аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ)) является высокочувствительным показателем цитолиза гепатоцитов, что определяет ее ведущую роль в диагностике гепатитов различной этиологии. При цитолитическом процессе, развивающимся в печени больного вирусным гепатитом, преобладает “вымывание” АЛТ, степень повышения АСТ существенно меньше (таблица 2).

Таблица 2. Определение активности ферментов в сыворотке крови

Фермент

Нормальные* значения

Значения при гепатитах

Специфичность для гепатоцитов

Аланинаминотрансфераза (АлАТ)

до 40 Ед/л

увеличение

Аспартатаминотрансфераза (АсАТ)

до 40 Ед/л

увеличение

Сорбитдегидрогеназа (СДГ)

до 17 Ед/л

увеличение

Фруктозо-1-фосфатальдолаза (Ф1ФА)

до 1 ЕД

увеличение

Урокиназа

до 1ЕД

увеличение

Щелочная фосфатаза (ШФ)

31-115 Ед/л дети: до 350 Е/л

увеличение

* значения приведены в соответствии с рекомендациями диагностических тест-систем, используемых в КДЛ НПФ “Литех”

Для дополнительного подтверждения гепатогенной природы ферментемии можно определить активность печеночноспецифических ферментов – сорбитдегидрогеназы, фруктозо-1-фосфатальдолазы, урокиназы и др. Они локализуются преимущественно в гепатоцитах и их выявление в крови однозначно связано с патологией печени.

6. Эпидемиология

По данным ВОЗ в 2001 году хронические

заболевания печени были причиной 1,4 млн смертей,

включая 796 тыс. случаев смерти от цирроза и 616

тыс.- от рака печени. Как минимум 20% этих смертей

связывают с вирусом гепатита С( ВГС).Его

распространенность составляет 170 млн человек.


Приблизительно у 2 млрд человек во всем мире ( т.е

у одной трети мировой популяции) имеются

серологические маркеры НВV- инфекции, из них

маркеры хронической инфекции – у 350 млн.

В республике Беларусь также отмечен неуклонный


рост заболеваемости хроническими вирусными

гепатитами с 8,8 на 100 тыс населения до 26,34 в

2005 году. Анализ возрастной структуры

заболевших показывает ,что наиболее поражаемыми

возрастными группами являются подростки и

взрослые от 15 до 40 лет, их удельный вес в РБ

составляет 75%. Даже при использовании

современных методов диагностики в 5-25% случаев


природа острых и хронических гепатитов остается

нераспознанной

Белковые пробы

При острых вирусных гепатитах общее содержание белков плазмы крови и их состав практически не изменяются. Исключение представляет тимоловая проба, в норме имеющая значения до 4 ЕД и возрастающая до 6-8 ЕД при гепатитах.

При ХГ на стадии ЦП могут наблюдаться уменьшение концентрации альбумина в сыворотке крови, снижение протромбинового индекса (менее 70%), уменьшение концентрации других факторов свертывания крови в рамках синдрома печеночно-клеточной недостаточности. Дополнительными показателями активности гепатита являются ускорение СОЭ (і15 мм/ч), повышение концентрации гамма-глобулинов сыворотки.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:

Отправить ответ

avatar
  Subscribe  
Notify of
Adblock detector